Особенности хранения препаратов ботокса

Использование ботулинического нейротоксина как медицинского препарата требует разработки подходящих производственных процессов, отвечающих самым высоким стандартам безопасности и качества фармацевтической продукции. Исключительные свойства препарата обусловили требования безопасности не только для продуктов, но и для персонала и условий труда в процессе производства. В настоящее время существует ряд клинических продуктов, полученных с использованием различных производственных процессов и имеющих разные конечные лекарственные формы.

Специфика производства ботулинического токсина

Свойства ботулинического токсина

Активный элемент в препаратах ботулинического токсина (БТ или ботокса) является белковым комплексом, полученным из Clostridium botulinum. Комплекс состоит из биологически активного нейротоксина и нескольких белков. При физиологических условиях предполагается, что из комплекса высвобождается чистый нейротоксин.

Молекулярная масса комплекса составляет около 150 000 дальтон. Он состоит из тяжелой белковой цепи (около 100 000 дальтон) и более легкой белковой цепи (около 50 000 дальтон), соединенных при помощи одного или нескольких дисульфидных мостиков (связей). В состав комплекса входят также другие нетоксичные белки, обладающие гемагглютинирующими свойствами.

Ботулинический токсин — один из самых сильнодействующих токсинов в природе. Средняя летальная доза (LD50) БТ серотипа А составляет 0,001 мкг/кг.

Активность препаратов выражают в единицах действия (ЕД): одна единица соответствует средней летальной дозе для мышей. Следовательно, 50 ЕД означает, что содержимое флакона может убить 50 мышей. Для человека массой 70 кг летальной считается доза 3000 ЕД. Удельная активность Botox® составляет приблизительно 20 единиц/нг нейротоксина белкового комплекса. Ботокс получил широкое применение в неврологии, реабилитации, урологии, лечении болей, мигреней, потливости, а также в эстетических процедурах.

Безопасное и эффективное использование препаратов на основе ботокса зависит от надлежащего хранения продукта, выбора правильной дозы, и надлежащих методов применения.

Производители препаратов на основе ботулинического токсина

В настоящее время основным производителем ботокса типа А для клинического использования является международная компания Allergan (Калифорния, США, Вестпорт, Ирландия).

Торговые марки Allergan:

  • Botox® /Botox®
  • Cosmetic/Vistabel® /Vistabex® /Vista®.
  • Ipsen Pharma (Франция) и Wrexham (Великобритания)

являются вторыми по величине с брендами Dysport® и Azzalure®. Merz Aesthetics (Германия) производит бренды Xeomin® и Bocouture®. Три других производителя находятся в странах Азии. Medy-Tox (Корея) выпустил бренд Meditoxin®/Neuronox®/Siax®, производство которого началось в Корее, а в настоящее время развивается в других странах, например, в Латинской Америке. Hugel Inc., также основанный в Корее, производит еще один препарат ботокса типа А под названием Botulax (Zentox или Regenox в других странах). Институт биологических препаратов Ланьчжоу (LIBP, Ланьчжоу, Китай) выпустил лицензированный препарат BTXA, который распространяется в Гонконге, а также в других странах под разными названиями:

  • Lantox в России;
  • Lanzox в Индонезии;
  • Prosigne в Бразилии;
  • Liftox в Эквадор;
  • Redux в Перу (препарат доступен в более, чем 30 странах).

Серотип ботокса типа В под названием Myobloc®/Neurobloc® производится US WorldMeds (Кентукки, США). Первоначально продукт был предназначен для пациентов, которые вырабатывают антитела к типу А. Препарат разрешен для клинического использования, но для лечения требуются значительные дозы, в 50 раз выше, чем типа А, из-за более низкой активности на единицу токсина. Продукт не используют в эстетической практике.

В России зарегистрированы следующие препараты ботокса типа А: Botox®, Disport®, Lantox®, Xeomin®.

Производство ботулинического токсина

Clostridium botulinum является облигатным, спорообразующим анаэробом. Это грамположительная бактерия, встречающаяся в природе повсеместно. Для успешного производства клинического материала необходимо соблюдение ряда требований.
Анаэробные требования означают, что кислород должен быть исключен из среды на первых стадиях культивирования бактерий в биореакторе (ферментёре) или стеклянном сосуде. Традиционные питательные среды включают восстановитель, чтобы соблюсти анаэробные условия, а также дополнительный азот. Во время роста бактерии выделяют ряд летучих кислот, что поддерживает анаэробную среду и обусловливает характерный аромат выращиваемой культуры.

Необходимо соблюдение строжайших мер безопасности, чтобы предотвратить загрязнение окружающей среды. Газы, выделяющиеся во время стадий роста, создают давление и перед выпуском должны быть тщательно профильтрованы, чтобы исключить возможность выделения бактериальных аэрозолей.

По окончании бактериального жизненного цикла неизбежно происходит спорообразование. В конечном активном продукте споры содержаться не должны, поэтому к производственному процессу добавляются стадии очистки от спор, обычно это ультрамикрофильтрация.

Сырой токсин очищают от культурального раствора с помощью кислотного осаждения в виде кристаллического комплекса, состоящего из токсина и ассоциированных белков. Кристаллический комплекс повторно растворяют в растворе, содержащем хлорид натрия и человеческий сывороточный альбумин, и фильтруют перед вакуумной или сублимационной сушкой.

Формы препаратов ботокса

Производство активного ботокса включает культивирование бактерий, очистку сырого БТ, получение клинического продукта как комплексного (или очищенного) нейротоксина и заключительное хранение. Для удобства при хранении препарат может быть приготовлен в виде лиофилизированного порошка, который можно восстанавливать перед применением с помощью физиологического раствора или воды. Лекарственная форма может быть изначально представлена в виде раствора. К сожалению, ботокс трудно стабилизировать (т.е. сохранять в состоянии, когда снижение биологической активности минимизируется).

Готовый продукт или лекарственное средство представляет собой сочетание самого токсина, нетоксичных белков и вспомогательных веществ. Препараты различных фирм различаются по:

  • штамму культивируемой бактерии;
  • методам подготовки и очистки препарата;
  • концентрации стабилизатора (альбумина);
  • наличию добавок (лактоза, сахароза, хлорид натрия).

Botox и Dysport представляют собой стерильную лиофилизированную форму БТ типа А в виде порошка в вакуумном запечатанном флаконе. В этой форме ботокс устойчив в течение примерно 4 лет. Например, один флакон Ботокса (100 ЕД) содержит около 100 единиц комплексного БТ типа А, 0,5 мг человеческого сывороточного альбумина и 0,9 мг хлорида натрия.
Другие коммерческие формы ботокса: Dysport (смесь комплекса БТ, альбумина и лактозы в виде порошка); Myobloc (раствор БТ типа B, альбумина, сукцината и хлорида натрия при рН 5,6).

Botox - торговая марка ботулинического токсина компании Allergan

Условия хранения препаратов на основе ботулинического токсина

Ботулинический токсин легко теряет активность

Ботулинический токсин - очень чувствительный яд, который легко подвергается денатурации с потерей токсичности.

Как правило, активность ботулинического токсина (который является внутриклеточной пептидазой) зависит от его пространственной конформации (структуры). БТ типа А детоксифицируется при температурах выше 40°C (особенно в щелочной среде), под влиянием различных химических веществ, а также при образовании пузырьков на поверхности раздела жидкость/воздух. Например, спирт не может быть использован для разведения препарата или очищения кожи перед инъекцией, так как вызывает денатурацию и нейтрализует токсин.

Модель молекулярного строения ботулинического токсина серотипа А
Разбавление комплекса токсина до низких концентраций, используемых в медицине, приводит к быстрой детоксикации ботокса в отсутствие стабилизирующего агента. Разведение ботокса из раствора, содержащего мг/мл токсина, до раствора, содержащего нг/мл, представляет значительные трудности из-за быстрой потери удельной токсичности при таком сильном разбавлении.

Для стабилизации ботулинического токсина используют белки животного происхождения (человеческий сывороточный альбумин и желатин). Однако наличие белков в конечном препарате представляет потенциальные проблемы из-за того, что некоторые стабильные вирусы, прионы и другие инфекционные или патогенные возбудители могут загрязнять ботокс, найдя в препарате питательную среду.

Особенности восстановления (разведения) препаратов ботокса

Сухая форма препарата ботокса может быть восстановлена (переведена в форму раствора для инъекций) разведением при помощи стерильного физиологического раствора без консерванта (0,9% раствор хлорида натрия).

Токсин очень чувствителен к механическим нагрузкам, теплу и рН, так что следует соблюдать осторожность во время разведения, чтобы не вызвать чрезмерного нагрева или турбулентности. Поскольку БТ денатурирует при барботаже или сильном встряхивании, растворитель осторожно вводят в пробирку. Восстановленный Ботокс® представляет собой прозрачную, бесцветную жидкость без твердых частиц.

Эффективность ботокса может быть снижена низкими концентрациями токсина и наличием химических веществ в растворителе.

Для большей клинической эффективности, производители рекомендуют врачам использовать препарат в течение определенного срока после разведения в зависимости от бренда.

Условия хранения препаратов, содержащих ботулинический токсин

В таблице 1 представлены лицензионные условия хранения, принятые в настоящее время для трех основных семейств продуктов.

Таблица 1. Условия хранения, лицензированные для различных брендов препаратов БТ в крупнейших регионах мира (официальные данные)

Продукт

ЕС

США

Япония

Австралия

Dysport® (300 и 500 единиц Спейвуда)

2 года при 2–8°C

12 месяцев при 2–8°C, защищая от света

Н/д

2 года при 2–8°C

Azzalure® (125 единиц Спейвуда)

2 года при 2–8°C

Н/д

Н/д

Н/д

Botox® (50, 100

и 200 единиц)

3 года при 2–8°C или при/ниже -5°C

3 года при 2–8°C (100 единиц) или 2 года при 2–8°C (200 единиц)

Ниже 5°C (стабильность препаратов в 50 и 100 единиц обеспечивается 2 года)

2 года при 2–8°C (200 единиц) или 3 года (100 единиц)

Botox® Cosmetic (50 и 100 единиц) /Vistabel®/Vistabex® (50 единиц)/

Botox Vista® (50 единиц)

3 года при 2–8°C (Vistabel®/Vistabex®)

3 года при 2–8°C (Botox® Cosmetic)

Ниже 5°C (Botox Vista®)

Н/д

Xeomin® (50 и

100 единиц)

4 года при 25°C или ниже (100 единиц), 3 года при 25°C или ниже (50 единиц)

До трех лет при комнатной температуре (20-25°C), в холодильнике при 2-8°C, или морозильнике при температурах от -20 до -10°C

Н/д

Н/д

Bocouture®

3 года при 25°C или ниже

Н/д

Н/д

Н/д

Myobloc® /

Neurobloc®

3 года при 2–8°C (защищая от света)

3 года при 2–8°C (защищая от света)

Н/д

Н/д

Н\д — продукт недоступен в данном регионе.
Первоначально Botox должен был храниться при температурах ниже -5°C, тогда как Dysport всегда хранился при 2–8°C. Для Botox теперь принят смешанный набор условий хранения: или ниже −5°C или при 2-8°C. Длительность срока хранения для Botox и Dysport составляет до 3 лет и 2 лет соответственно.

Xeomin может храниться при температурах ниже 25°C. Уже с первого появления на рынке Merz заявил о повышенной температуре хранения Xeomin, опубликовав данные о температурной стабильности препарата. Сообщалось о кратковременном (до одного месяца) хранении препарата при температуре до 60°C. Причина высокой термостабильности заключается в том, что семейство препаратов Xeomin содержит самую высокую концентрацию человеческого сывороточного альбумина (ЧСА), - в восемь раз выше, чем Dysport и вдвое выше, чем Botox. ЧСА является исключительно стабильным человеческим белком. Процесс производства ЧСА всегда включал стадию нагревания до 60°C в течение 10 часов для инактивации вирусов. Высокая концентрация ЧСА в Xeomin по-видимому, повышает устойчивость продукта к высоким температурам. Другие исследователи связывают термостабильность Xeomin с тем, что в отличие от других препаратов БТ типа А, он содержит только чистый нейротоксин без ассоциированных белков. Возможность хранения препаратов Xeomin при температурах до 25°C (до 30°C в некоторых странах, таких, как Бразилия) расширяет возможности транспортировки, тем не менее, она должна проводиться в контролируемых температурных условиях, как и других продуктов БТ.

Xeomin - самый термостабильный препарат ботулинического токсина
Некоторые из новых формул с низким количеством единиц, такие, как Azzalure® или Vistabel®, имеют срок годности «родителей», т.е. исходных продуктов.

Стабильность и условия хранения препаратов ботокса после разведения

Стабильность продуктов ботокса после разведения с использованием стерильного 0,9%раствора хлорида натрия как рекомендуемого растворителя, также является областью коммерческого соревнования. Срок годности разведенных препаратов является переменным в зависимости от требований отдельных лицензирующих органов. Детали ряда лицензированных условий показаны в таблице 2.

Восстановленный препарат нельзя замораживать. Замораживание может ускорить денатурацию ботокса, значительно снижая продолжительность действия после инъекции. Показано, что частично денатурированный из-за неправильного хранения препарат Botox®, будет по-прежнему оказывать эффект, но срок действия значительно сократится. Другие исследования показали, что активность восстановленного токсина снижается со временем, хотя через 1 неделю после разведения может сохраняться примерно 50% исходной активности.

Изготовители могут предоставить лишь ограниченную информацию о стабильности разведенных препаратов, поэтому клиницисты выполнили многочисленные собственные исследования с целью увеличения срока годности разведенного препарата или использования альтернативных растворителей. В первую очередь, эти исследования направлены на изучение возможности сохранения клинических эффектов в течение длительного времени после разведения.

Основной риск для восстановленного препарата — микробная обсемененность, поскольку среда богата белком (ЧСА) и является питательной средой для роста микробов. Тем не менее, некоторые исследования показывают, что активность ботокса может сохраняться до 6 недель при хранении в холодильнике.

Таблица 2. Условия хранения разведенных препаратов, лицензированные для семейств продуктов БТ в различных регионах мира

Продукт

ЕС

США

Япония

Австралия

Dysport® (300 и 500 единиц Спейвуда)

До 8 часов при 2–8°C

До 4 часов при 2–8°C, защищая от света

Н/д

До 8 часов при 2–8°C

Azzalure® (125 единиц Спейвуда)

До 4 часов при 2–8°C

Н/д

Н/д

Н/д

Botox® (50, 100

и 200 единиц)

До 24 часов при 2–8°C

До 24 часов при 2–8°C

Использовать немедленно

До 24 часов при 2–8°C

Botox® Cosmetic (50 и 100 единиц) /Vistabel®/Vistabex® (50 единиц)/

Botox Vista® (50 единиц)

До 4 часов при 2–8°C (Vistabel®/Vistabex®)

До 24 часов при 2–8°C (Botox® Cosmetic)

Использовать немедленно

Н/д

Xeomin® (50 и

100 единиц)

До 24 часов при 2–8°C

До 24 часов при 2–8°C

Н/д

Н/д

Bocouture®

До 24 часов при 2–8°C

Н/д

Н/д

Н/д

Myobloc® /

Neurobloc®

Использовать немедленно

До 4 часов при 2–8°C (защищая от света)

Н/д

Н/д

Вы можете получить консультацию специалиста:

Читайте так же:

Ограничения после ботокса

Миграция ботокса из зоны инъекций в близлежащие ткани может вызвать осложнения. Чтобы избежать миграции, необходимо соблюдать ряд ограничений, особенно, в первые 48 часов после процедуры.

Как можно поднять брови с помощью ботокса?

Инъекция ботулотоксина в область наружной верхней части круговой мышцы глаза – процедура, позволяющая поднять брови ботоксом. Эффект после введения заключается в придании бровям желаемого ...

Последствия ботокcа: насколько всё страшно?

Последствия Ботокса – это целый ряд зафиксированных официальной медициной осложнений, которые проявляются вследствие неправильного проведения ботоксной терапии. Многие из них могут достато...

Чем можно заменить действие ботокса

К альтернативам ботокса можно отнести различные средства на основе ботулотоксина и методы аппаратной косметологии. К последним относится химический пилинг и Ulthera System.

Самое популярное:

Все материалы на нашем сайте носят исключительно ознакомительный характер.
Обязательно проконсультируйтесь со специалистом.